若羧酸的酰肼用堿金屬氫氧化物皂化，其反應混合物再用醋酸酸化時，所產(chǎn)生的肼可加以過量的對－二甲胺基苯（甲）醛來作出檢定。按照肼的存在量，將有橙至黃色出現(xiàn)。如將酰肼的中性或弱酸性溶液直接和醛的酸溶液加熱，也會發(fā)生同樣的反應。顯然酰肼被酸類部分皂化，而肼則和醛反應，經(jīng)常地從快速建立的水解平衡中移去。這個顯色反應中，醛和肼縮合試驗中，方程式（1）中所形成的醛連氮（Ⅱ），立即在酸中溶解而產(chǎn)生醌型陽離子（Ⅲ）：
如將這個不發(fā)螢光的橙色或黃色溶液一滴放在濾紙上，則（Ⅲ）的形成，可以作出高度靈敏性的檢定。所留下的紅色到粉紅色斑點，是會在紫外光下發(fā)出深紅到鮭色螢光的。這個效應，可在很稀而幾乎無色的溶液中看到；可能是由于（Ⅲ）和濾紙形成能發(fā)螢光的被吸附物，而按照（Ⅲ）的結構，應考慮到交換及加成兩種吸附作用。濾紙上紅色到鮭色的螢光斑點，用氨處理會變?yōu)樗{-綠色；但經(jīng)酸類作用，即會恢復紅色螢光。這種可隨意重復的螢光顏色變化，肯定是由于被吸附的（Ⅲ）和被吸附的（Ⅱ）互相轉(zhuǎn)變。
芳族胺類也可和對－二甲胺基苯（甲）醛縮合形成黃到橙色的希夫氏堿類。這種希夫氏堿類的很濃溶液，在濾紙上會留下發(fā)綠色螢光的斑點，這些斑點浸于氨液酒精后即消逝，再加酸化亦不能恢復。但是希夫氏堿（Ⅱ）的藍-綠色螢光斑點卻會留在濾紙上，而滴以酸后，紅色螢光又可恢復，因此，這就有可能在縱有芳族胺鹽存在之下，對酰肼類作出檢定了。
下面的試驗法需要用過量的對－二甲胺基苯（甲）醛。所規(guī)定的試劑量，對于檢定酰肼含量不超過1％的試液，已是有足夠的過量。若含量較濃，則醛將和未皂化的酰肼在其自由－NH2基團上縮合。這個縮合作用將產(chǎn)生一種發(fā)黃色螢光的產(chǎn)物。
操作手續(xù) 將試液一滴在微量試管中用醛的酸性溶液一滴處理，而將混合物放水浴中溫熱5～10分鐘。冷卻的溶液，加水一滴后，取出一滴置于濾紙上。將紙浸于1：250的鹽酸后，放在紫外光下觀察。紅至鮭色的螢光表明一種酰肼存在。再浸于1：10氨時，斑點即變?yōu)樗{-綠色。
試劑：對－二甲胺基苯（甲）醛0．4克溶于20毫升酒精加2毫升濃鹽酸。
下列的物量，可被檢出：
| 0.5微克 氨基脲 | 0.1微克 對－硝基苯（甲）酰肼 | 0.1微克 間－吡啶羧酰肼（煙酰肼） |
| 0.05微克 苯酰肼 | 0.25微克 鄰－吡啶羧酰肼（皮考啉酰肼） | 0.05微克 對－吡啶羧酰肼（異煙酰肼） |
環(huán)狀3－氨基酞酰肼（“魯米諾”）沒有反應。
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