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       加熱至160°能產生氨的含氮化合物與草酸二甲酯（熔點54°；沸點163．3°）混和后，如加熱至上述溫度，將會產生草酰胺：

草酰胺在和硫代巴比土酸干熱時，會有深紅色產物形成；通過這一反應，可對草酰胺作出幾乎特效的檢定。磺胺嘧啶會有干擾。如上反應式所列，草酰胺的形成與有色物質的產生，可在一次操作中完成，這樣，就可允許對熱解時能產生氨的化合物得出檢定。

       這一范疇的化合物包括著：（1）脂族伯和仲胺類，（2）氨基酸類，（3）有機酸的銨鹽類，（4）脂族羧酸的酰胺類，（5）脲及其含自由NH₂－基的衍生物，（6）胍及其含自由NH₂－基的衍生物。
       應注意到，揮發(fā)無機酸的銨鹽，如和草酸二甲酯與硫代巴比土酸加熱到160°，也會發(fā)生草酰胺反應。因此，脂族伯、仲胺類的鹽酸鹽及硝酸鹽，也會給出正反應。
       操作手續(xù)    這個試驗在微量試管中進行。將少許固體或其溶液的蒸發(fā)殘渣，用數(shù)厘克草酸二甲酯和硫代巴比土酸處理，并放在130～160°的甘油浴中加熱。1～3分鐘內如有紅色產物形成，即示正反應。
       根據(jù)這個試驗的靈敏度所示，可以說下列氨－給予體（草酰胺的生成者）的數(shù)量，已可檢出：

       這個操作手續(xù)，曾檢出約0．5毫克的下列各物：芐胺、磷酸精脒、磷酸精胺、鹽酸乙（撐）二胺、α－丙氨酸、l－天冬酰胺、l－組氨酸、丙烯酰胺、扁桃酰胺、煙酰胺、壬二酰二胺、脲、乙酰脲、甲脲、烯丙基脲、苯脲、不對稱－二苯脲、縮二脲、胍、二苯胍、苯胍、對稱－三苯胍^①、1－苯胺基脲（170°）、鹽酸氨基脲。

    ① 這個化合物按其對稱的化學式，應無應應。必須假定它或許有下列的平衡：