生物堿的薄層色譜實(shí)驗
實(shí)驗室k / 2019-08-08
一、目的
(1)掌握薄層硬板的制備方法。
(2)掌握薄層色譜的一般操作方法。
(3)了解薄層色譜在分離、鑒定方面的應(yīng)用。
二、提要
喹啉衍生物類生物堿可用薄層色譜法分離、鑒定。例如：
可用下列展開劑進(jìn)行展開。
丙酮-甲醇-二乙胺(5：5：1)
苯-乙醚-二乙胺(8：5：2)
氯仿-二乙胺(9：1)
氯仿-乙醇(9：1)
本實(shí)驗選用奎寧和辛可寧作試樣，苯-乙醚-二乙胺(8：5：2)作展開劑，用改良碘化鉍鉀試劑顯色。
三、儀器與試劑
(1)儀器：色譜缸、玻璃板(3×20cm)、毛細(xì)管、噴霧器、乳缽、電吹風(fēng)、天平。
(2)試劑：0.5％奎寧的氯仿溶液、0.5％辛可寧的氯仿溶液、待檢樣品、苯-乙醚-二乙胺(8：5：2)、改良碘化鉍鉀試劑、硅膠G。
四、實(shí)驗步驟
1.硅膠G板的制備 稱硅膠G1.5g置乳缽中，加水約3.5ml，輕輕研勻(約1～1.5min)，立即倒在整塊玻璃板(3×20cm)上，用乳缽研頭(或玻璃棒)稍加涂勻，隨后就用左手持玻璃板，用右手中指在背面輕輕敲擊玻璃板，使鋪成平坦均勻的薄板。立即放在水平臺面上靜置，使其自然干燥。用同樣方法再制一塊。然后于110℃烘箱中活化1/2～1h，置于干燥器中備用。
2.點(diǎn)樣 取薄板二塊，在距一端3cm處，用細(xì)針在兩側(cè)戳幾個點(diǎn)，作為起始線。分別按下面點(diǎn)樣：
端距：3cm；點(diǎn)距：1.5cm；點(diǎn)樣量：1～2次；點(diǎn)直徑：2～3mm。
3.展開 在色譜缸中放入展開劑7.5ml，將薄板放入色譜缸中，密閉，待飽和后(約10min)，展開，展開劑浸沒薄板下端的深度為0.5cm。待展開劑前沿離起始線約10cm時，(約需60min)取出，立即用鉛筆劃出前沿，用電吹風(fēng)吹干(可吹薄板的背面)。
4.顯色 在薄板上噴以改良碘化鉍鉀試劑，用鉛筆標(biāo)出斑點(diǎn)的位置，并記錄斑點(diǎn)的顏色。
5.定性 分別測量Rf值，鑒別待檢樣品，是奎寧還是辛可寧。
五、思考題
1.影響吸附薄層色譜Rf值的因素有哪些？
2.在操作中應(yīng)該注意哪些問題？
3.試比較比移值和相對比移值的優(yōu)缺點(diǎn)。
4.奎寧和辛可寧，哪個Rf值大？為什么？
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