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維生素B₁的檢定法

       這種維生素有各種不同的名稱，如硫胺（素）、抗神經(jīng)炎素、妥魯靈（Torulin），具有如下的結(jié)構(gòu)：

由于它的－NH₂基，使它可以進(jìn)行下列熱解縮合：

2RNH₂ → RNHR+NH₃

因此，如果維生素B₁在硫代巴比土酸共存下和草酸二甲酯一起加熱，就會(huì)形成紅色產(chǎn)物，這個(gè)反應(yīng)涉及熱解所產(chǎn)生的氨，作用于草酸二甲酯形成草酰胺。因此，對于熱解產(chǎn)生氨的化合物的檢定法中所述操作手續(xù)，可以適用于它的鹽酸鹽。鑒定限度為2．5微克鹽酸維生素B₁。
       由于并未見過含一氨基的它種維生素，所以這一根據(jù)草酸二甲酯和硫代巴比土酸存在下的熱解來檢定鹽酸（硝酸）維生素B₁的方法，在研究混合維生素方面，就可能具有價(jià)値了。
       如有熱解釋出氨的化合物同時(shí)存在，這個(gè)試驗(yàn)法就不可使用。
       維生素B₁（鹽酸鹽，硝酸鹽）含有的硫，可以加入磷鎢酸使其從稀溶液中沉淀下來。沉淀經(jīng)離心分離后，可以進(jìn)行硫的檢驗(yàn)。這法也可用于檢定混合維生素中的維生素B₁鹽。

維生素B₆的檢定法
       很多種自由對位的酚類可和2，6－二氯苯醌－4－氯亞胺縮合，形成有色的靛酚類，這些都是酸-堿指示劑。維生素B₆（鹽酸吡哆醇）含有一個(gè)酚型－OH基與一個(gè)自由對位，其反應(yīng)如下：

這一棕-黃色縮合產(chǎn)物暴露于氨時(shí)，由于形成一種不穩(wěn)定的酚銨，顏色變藍(lán)。
       操作手續(xù)    濾紙溶浸于2，6－二氯苯醌－4－氯亞胺的飽和苯溶液，并在空氣中干燥。小量固體試樣抹在試紙上，或放上水溶液一滴，就有棕-黃色斑點(diǎn)出現(xiàn)，在用氨熏蒸后轉(zhuǎn)成深藍(lán)色。藍(lán)色迅速減褪（酚銨失去了氨），但重新暴露于氨，色即恢復(fù)。
       鑒定限度：0．5微克  維生素B₆
       因酚類和2，6－二氯苯醌－4－氯亞胺有反應(yīng)，各種還原性維生素會(huì)使試劑還原而耗掉，這個(gè)試驗(yàn)不能直接應(yīng)用于有酚類或本身為還原劑的各種維生素（維生素B₁、B₂和C）存在時(shí)。在這些情況下，應(yīng)在微量離心管中，將試液一滴用磷鉬酸的飽和水溶液1～2滴處理，使維生素B₆（一種吡啶衍生物）沉淀成磷鉬酸鹽。任何存在的還原性化合物將被氧化而形成水溶的鉬藍(lán)，而不能氧化的酚類和酚性化合物都留下來未變。離心分離這藍(lán)色懸浮液，沉積物用水洗滌一次，再進(jìn)行離心分離，然后懸浮于1～2滴水中。取懸浮液一滴放試劑紙上，用氨熏蒸。磷鉬酸鹽發(fā)生分解，并將釋出的維生素B₆進(jìn)行靛酚反應(yīng)。磷鎢酸也可用來沉淀出維生素B₆。