液相色譜儀操作的一些問題
抖化學(xué) / 2022-11-07
溶劑的精制
只要可能，就應(yīng)使用全玻璃系統(tǒng)蒸餾過(guò)的溶劑，并應(yīng)通過(guò)硅膠床精制。一根直徑76.2毫米( 3英寸)長(zhǎng)1.2米，填充了大約250毫米粗硅膠的柱，應(yīng)能精制4.5升(1加侖)左右的溶劑。用
于純制目的的硅膠，不應(yīng)使用到完全失效，因?yàn)槿绻嗟娜軇?/span>通過(guò)柱床時(shí)，雜質(zhì)就會(huì)象在正常的液相色譜展開中那樣從精制柱中流出。
泵的問題
泵的問題通常起因于隔膜型或活塞型泵，常由于改變包括不相混溶液體的流動(dòng)相而產(chǎn)生。其癥狀是或者完全失去壓力沒有泵液作用，或者泵的輸出壓力波動(dòng)。如將流動(dòng)相直接從庚烷換成水，幾乎肯定會(huì)引起止逆閥的小球粘著，而導(dǎo)致失去壓力。這個(gè)問題可用泵使丙酮通過(guò)系統(tǒng)而解決。因丙酮與庚烷及水均可互溶。用一種與先前采用的所有流動(dòng)相均能混溶的溶劑通過(guò)泵以洗凈阻塞的止逆閥的原理，是一種通用的方法。有時(shí)止逆閥被硅膠的小顆?？ㄗ《芊獠粐?yán)。這是由于用作流動(dòng)相的溶劑未曾仔細(xì)濾過(guò)。這些硅膠顆粒常常難以除去，必須將止逆閥在盛于超聲浴的丙酮中清洗。如果變換溶劑時(shí)只用可混溶的溶劑，同時(shí)在溶劑的制備方面又注意充分保證色譜系統(tǒng)的清潔，則由泵所引起的故障就非常之少。
注射樣品的問題
連續(xù)的柱頭注樣進(jìn)入固定相床，最終，將導(dǎo)致對(duì)柱床的擾動(dòng)而使效率劣化。這可由在填充物的頂上鋪一層10毫米厚的玻璃微珠(直徑約40微米)而得以克服，因?yàn)閷?duì)玻璃珠床的擾動(dòng)將不會(huì)明顯地影響性能。玻瑞珠床亦有助于注射的樣品沿柱徑向分配。
另一方面，樣品可如前所述那樣，注射到位于填充物頂上的不銹鋼多孔燒結(jié)板上。如果使用樣品閥，在將樣品裝入環(huán)管以備進(jìn)樣之前，至少應(yīng)先以10倍體積的樣品溶液沖洗環(huán)管。這將保證除去
遺留在環(huán)管中的先前的任何痕量樣品。
檢測(cè)器的問題
關(guān)于檢測(cè)器的一個(gè)主要問題，是氣泡留在檢測(cè)池中，共表現(xiàn)是峰持久地超出刻度。氣泡在柱內(nèi)的產(chǎn)生，通常由流動(dòng)相極性的突然變化所引起。氣泡的形成，最常見于醇~水混合液。為了消滅氣泡的形成，溶劑應(yīng)在分析之前進(jìn)行脫氣。僅將溶劑在真空下振搖就可很容易地脫氣。如有氣泡粘著在檢測(cè)器池中，有兩種常用的辦法可除去它。(1)柱的流速應(yīng)顯著增大，并將檢測(cè)池的出口封住，通常是用手指堵住。這樣在檢測(cè)池中建立起壓力，氣泡體積減小而可以通過(guò)池終端的縮口部分。然而應(yīng)小心勿使檢測(cè)器中產(chǎn)生很大的壓力，因?yàn)檫@可能破壞檢測(cè)池的密封(通常為聚四氟乙烯封墊)，引起池子泄漏。(2)如上一個(gè)方法失敗，則應(yīng)松開檢測(cè)器和柱之間的聯(lián)接，用極性溶劑如丙酮反沖洗除去空氣。最好用充滿丙酮的皮下注射器聯(lián)接在池的出口來(lái)完成這一操作，當(dāng)氣泡已被除去，柱和檢測(cè)器之間的接頭被擰緊之后，注射器才能卸下。
為了減少氣泡停留在檢測(cè)池中的幾率，可將柱子聯(lián)到池的底部，使流出液向上通過(guò)池子，并經(jīng)一個(gè)倒置的U形管流出。與另一種聯(lián)接方法相反，這樣對(duì)池子加上一個(gè)流體靜反壓，減少了氣泡的體積，使之更容易通過(guò)池子。
基線不穩(wěn)
基線不穩(wěn)定可有短周期噪聲、長(zhǎng)周期噪聲、漂移或這些三種效應(yīng)中的任何組合形式(見附錄I )。
漂移，如其名字所示，是記錄筆緩慢地漂過(guò)記錄紙。漂移通常起因于柱子在更換溶劑后沒有完全達(dá)到平衡。連續(xù)使溶劑流過(guò)一段時(shí)間之后應(yīng)能消除漂移。如果是使用液一液色譜法，漂移經(jīng)常起因于固定相的流失，這一點(diǎn)可由保證進(jìn)入柱子的流動(dòng)相在柱溫下對(duì)固定相完全飽和而得以消除。漂移的另一來(lái)源，起因于溫度變化。如果溶劑貯槽重新裝滿不同溫度的新鮮溶劑，這可在柱中產(chǎn)生輕微的熱梯度，直至達(dá)到溫度平衡之前，將引起對(duì)溫度敏感的檢測(cè)器如折光率檢測(cè)器、某些情況下還有UV檢測(cè)器呈現(xiàn)漂移。
短周期噪聲可從記錄圖上的“頓抖”而得以辨認(rèn)。這種不穩(wěn)定性，通常起因于記錄儀不正確的靈敏度調(diào)節(jié)或放大器的不穩(wěn)定性。如噪聲來(lái)自記錄儀，正常的調(diào)節(jié)通常將能使之消除，但如來(lái)
自放大器，則建議請(qǐng)制造廠家進(jìn)行檢修。
長(zhǎng)周期噪聲，定義為具有相當(dāng)于流出峰的頻率的基線不穩(wěn)定性，其范圍可從幾秒鐘到近于1分鐘。這一類型的噪聲是最嚴(yán)重的，因?yàn)樗窍拗茩z測(cè)器靈敏度的因數(shù)。這種噪聲與流出峰無(wú)法識(shí)別一一它可起因于各種來(lái)源，如柱的流失，沾污的柱，溶劑的雜質(zhì)和溫度的波動(dòng)。保證-個(gè)色譜系統(tǒng)的絕對(duì)清潔可使它降低至最小值，但并不能完全消除，因此它是制約著檢測(cè)器最大靈敏度的根本因數(shù)。在檢測(cè)器設(shè)定靈敏度的最大值，長(zhǎng)周期噪聲不應(yīng)大于滿刻度偏轉(zhuǎn)的1或2 %。
假峰
一個(gè)色譜圖的解釋，常?？杀煌蝗怀霈F(xiàn)的假峰弄得混亂。它們可由一些不同的來(lái)源所引起。
沾污的注射器
被先前樣品沾污了的注射器，可能是引起假峰的最普通的原因。注射器應(yīng)在每次采樣之間仔細(xì)地洗凈，1微升的注射器更需特別注意。如果可能，它們應(yīng)在減壓條件下，以大量溶劑清洗。
樣品物質(zhì)常常爬到注射器芯子后面，在連續(xù)取樣時(shí)再慢慢洗濾出來(lái)。
沾污的隔膜
隔膜可吸附某些樣品，當(dāng)注射器刺穿隔膜時(shí)就將痕量的先前的樣品帶到柱上。這一來(lái)源的假峰，可由更換隔膜而得以消除。
溶于樣品中的空氣
溶于樣品中的空氣，將在樣品被注人那點(diǎn)，使溶劑的折光率發(fā)生變化，當(dāng)此溶劑流出時(shí)，可使折光率檢測(cè)器和UV檢測(cè)器都產(chǎn)生響應(yīng)一-UV檢測(cè)器對(duì)折光率也和對(duì)溶質(zhì)吸收一樣敏感。在真空條件下輕輕振播以除去溶于樣品的空氣，將消除這一效應(yīng)。
樣品溶劑的流出
只要可能，樣品任何時(shí)候都應(yīng)溶解于流動(dòng)相,但有時(shí)由于溶質(zhì)的溶解度太差而不可能這樣做。在此情況下，常常采用極性更大的溶劑，當(dāng)樣品被注到柱上時(shí)，不同的溶劑分別流出而形成假峰。即使流動(dòng)相保持著原來(lái)的成分，但極性更強(qiáng)的組分濃度的增大，仍將使假的溶劑峰出現(xiàn)。例如，假定所用流動(dòng)相是含5%乙酸乙酯的庚烷，為了得到適當(dāng)?shù)娜芙舛?，樣品溶于?0%乙酸乙酯的庚烷，則由于增大的乙酸乙酯的濃度脈沖，將以完全與空穴色譜法的同一方式被洗脫，所以色譜圖仍將顯示一個(gè)溶劑假峰。
如果必需使用極性更強(qiáng)的樣品容劑以保證溶解度，假峰就無(wú)法消除，只能把它作為假峰而予以忽視。
檢測(cè)器的頂替效應(yīng)
這一效應(yīng)不是引起假峰的經(jīng)常原因，但有時(shí)能混淆結(jié)果。共起因在于流動(dòng)相中極性更強(qiáng)的溶劑吸附在玻璃或石英檢測(cè)器池壁上成為一個(gè)薄層。當(dāng)一個(gè)極性溶質(zhì)被洗脫時(shí)，可頂替出此吸附層而產(chǎn)生-一個(gè)畸形的峰。這一.效應(yīng)也難以消除，但在有些情況下，可在流動(dòng)相中用一個(gè)較低濃度的、更強(qiáng)的極性溶劑來(lái)實(shí)現(xiàn)此目的。例如含10%乙酸乙酯的庚烷溶液會(huì)被含3%四氫呋哺的庚烷溶液所頂替。變換的原理已在論述溶質(zhì)一溶劑相互作用的一章(第3章)中闡明。
液相色譜儀操作步驟
先對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機(jī)系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。然后對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。一般情況下，流動(dòng)相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，zui重要的是儀器基線走后，方可進(jìn)樣測(cè)試。
液相色譜儀注意事項(xiàng)
流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。壓力不能太大，不要超過(guò)150kgf/cm2 。
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