液相色譜用儀器組成
抖化學 / 2022-11-05
溶劑貯槽
溶劑貯槽應具有250毫升的容量，”最好配有干燥管以防止溶劑從大氣中吸水。貯槽可用玻璃或不銹鋼制成，但如用玻璃的則應為琥珀色，以防止吸收紫外線而引起氯代烴的分解。
溶劑泵
溶劑泵有兩種類型一一注射型或振動隔膜或活塞型。后一種類型較好，因其在更換溶劑時易于清洗，從而減少了溶劑的消耗。
隔膜或活塞型泵還可在泵前低壓產(chǎn)生梯度，而且可對梯度系統(tǒng)使用任何種數(shù)的溶劑。另方面，注射泵類則每種溶劑就要求有一個泵。活塞或隔膜型閥的泵容量應為100~200微升，并在入口壓力高達35兆牛頓/米²(5000磅/英寸²)時提供0.1到10毫升/分
的流速。為了制備工作而使用大口徑柱子時，泵只須產(chǎn)生14兆牛頓/米²(2000磅/英寸²)的壓力，但需提供高達100~ 150毫升/分的流速。
注樣裝置
基本上有兩種類型的注樣系統(tǒng)一注射 器或樣品閥。注射器采用一個橡皮隔膜，可工作于高達14兆牛頓/米² (2000磅/英寸²)，并可用來直接注入填充物內(nèi)，這樣可以得到最高的柱效。但此方法有可能擾亂填充物頂部，所以常在填充物頂部放置- -塊
多孔的燒結(jié)材料，樣品即注在此燒結(jié)材料上。這種注樣方法提供重現(xiàn)性較好的結(jié)果，但效率稍低?？?得到能工作于高達42兆牛頓/米(6000磅/英寸²)的進樣閥。這類進樣閥更易于操作，與樣品注射在多孔燒結(jié)料上產(chǎn)生相同的理論塔板數(shù)，給出重現(xiàn)性很好的結(jié)果，因此對于重復的分析是理想的。
柱
推薦使用長度100、250或500毫米和外徑6.85毫米(1/4英寸)或更大的色譜柱。這些柱填充了微粒固定相時，在純分析性分離和利用幾個毫克溶質(zhì)的半制備性分離之間提供了良好的折衷。一根填充了10微米硅膠或鍵合相的250毫米柱，至少應得到5000
理論塔板，即每米20000理論塔板數(shù)。如果采用薄殼填充物，則應采用較長的柱和更小的直徑。例如對于薄殼離子交換介質(zhì)，通常采用內(nèi)徑1.59毫米( 1/16英寸)的1米柱子。
檢測器
對液相色譜法的一般工作有三種檢測器:紫外檢測器、移動絲檢測器和折光率檢測器。
單波長或雙波長紫外檢測器
這種檢測器最常用，具有的最高靈敏度在信噪比2的時候約為10~8克/毫升。靈敏度變動于10~7和10~9克/毫升之間，取決于所測物質(zhì)的消光系數(shù)。該檢測器可用于梯度洗脫，但選擇的溶劑只限于在所采用波長處不具明顯UV發(fā)色團的那些物質(zhì)。檢測器的缺點是不能檢出在UV區(qū)沒有吸收的物質(zhì),因此不能檢測出樣品中未知數(shù)目的組分或甚至已知共存在的組分。這種檢測器是比較便宜的。
移動絲檢測器
這種檢測器體積大、昂貴并最難操作。然而，它能檢出柱中流出的所有非揮發(fā)性含碳物質(zhì)，其響應值大致與溶質(zhì)的含碳量成正比。其結(jié)果是用這一檢測器所得到的色譜圖，在不同的洗脫溶質(zhì)之間給出定量關系的正確效果。當用于梯度洗脫時，任何極性度或任何化學結(jié)構的溶劑均可采用,唯一的條件是它們較易揮發(fā)。這種檢測器的靈敏度約為10~8克/毫升，因而比UV檢測器稍差。
折光儀檢測器
這一檢測器是所有LC檢測器中靈敏度最低的(約10~5克/毫升)，且只能有效地用于等強度展開的條件。它是三種檢測器中最便宜的，當前的應用主要限于制備液相色譜。
上述檢測器是最常使用的，全都具有線性響應，能用作定量分析。填充以微粒固定相的柱子，可提供10000~20000理論塔板的效率一在此情況下， 檢測器的死體積極 端重要。如果檢測的體積很大，引起的譜帶擴展可能妨礙實現(xiàn)柱子固有的較高效率。
因此，建議無論是UV檢測器還是折光儀檢測器，它們的檢測池體積不應大于8微升，最好更小些(見附錄I)。
色譜儀的形式
色譜儀所取的形式，可為整機式或分開的單個積木組裝式。整機式簡單，但是昂貴，且不易裝人新的或另外的設備，所以它是有限制的。積木式色譜儀需要一個貯槽、泵、注樣頭和柱，檢測器及其附屬電子設備，還有記錄儀。這樣一個連結(jié)起來的系.
統(tǒng)，就是一臺非常靈便的色譜儀，使能快速有效地裝入不同的或新的裝置。對這種系統(tǒng)的一個謬誤的印象是它的組裝需要有儀器制造的知識。事實上，只要求化學家連結(jié)和擰緊半打的Swege接頭或類似的接頭以使之運轉(zhuǎn)。
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