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比色法和分光光度法的誤差和測量條件的選擇


實驗室k / 2019-07-15

誤差的來源

       比色法和分光光度法誤差主要來自以下三個方面:
       1.溶液不遵守光的吸收定律而引起的誤差    朗伯-比爾定律要求被測物質的化學穩(wěn)定性要高,溶液濃度也不可過大。如果濃度過大或顯色條件控制得不好,在測定過程中,被測物質逐漸發(fā)生離解、締合,使被測物質的組成改變,所得標準曲線不再成直線,因而產(chǎn)生誤差。
       其次,吸收定律只是在入射光為較純的單色光情況下才是正確的。然而,純粹的單色光是不容易得到的,實際上應用的是一定波長范圍內(nèi)的復合光,當采用復合光進行測定時也會產(chǎn)生偏離吸收定律的現(xiàn)象,往往使標準曲線上部發(fā)生彎曲,產(chǎn)生誤差。
       2.由于操作者主觀因素引起的誤差    由于操作不夠熟練或操作不當;稀釋或顯色過程的操作不夠嚴格;被測液與標準液不是同時配制的;目視法對觀察顏色感覺不夠靈敏或長時間觀察同一顏色使視覺疲勞,從而難以分辨同一顏色的不同深度;以及樣品、試劑等的稱量誤差;讀取吸收度或透光度時估計刻度不夠準確等等,所引起的誤差都屬于主觀誤差。針對主觀誤差產(chǎn)生的原因,應努力設法減少或避免??蓢栏癜床僮饕?guī)程去做,保持科學的作風,加強責任感,這樣可使主觀誤差減少到最小的程度。
       3.儀器誤差    凡由于儀器的原因所引起的誤差均屬于儀器誤差,如儀器不夠精密,比色杯的厚度及均勻度不合要求、機械部件靈敏性差、刻度欠準確、光源不夠穩(wěn)定、光電元件失靈、透過濾光片或單色光器的光其波長范圍太寬、雜散光的影響等,都會引入誤差。為克服由于儀器引起的誤差,要對儀器進行定期校準和嚴格要求按正規(guī)操作使用及維護。

比色法和分光光度法測量條件的選擇

       1.入射光要選擇與測定液有最大吸收的單色光,且波長范圍要窄,否則被測物質將吸收雜散光和非最大吸收波長的光,使正常的光吸收減弱,實際吸收度A相對降低而引起誤差。在用λ最大處的單色光透過溶液時,溶液的吸收度為最大,指針偏移A值的格數(shù)也最多,在這種條件下,既使是較小濃度的被測溶液,也能夠明顯地觀察出偏移的格數(shù)來,故靈敏性較高。
       2.控制準確的讀數(shù)范圍,讀取A或T值要控制在0.8~0.1或20%~80%范圍內(nèi)才好。
       3.選擇適當?shù)目瞻?參比)溶液,理想的空白溶液應當是被測液中除去被測組分以外的不吸收單色光的那些物質組成的液體。在具體測定時往往在操作步驟中規(guī)定以某液為空白溶液(如蒸餾水等)。
       4.根據(jù)不同的試樣選擇適當?shù)娘@色劑,控制好顯色反應的條件如顯色劑用量、溶液酸度、顯色時間及顯色溫度等。

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