埃爾利希氏重氮試驗(yàn)法,在生物化學(xué)上廣泛用以檢定具有生理重要性的物質(zhì),特別是苯酚衍生物與咪唑衍生物。這個(gè)試驗(yàn)法可對(duì)能投入偶合反應(yīng)的化合物,作為靈敏的初步試驗(yàn)法。所用的試劑,為重氮苯磺酸(Ⅱ)的新配溶液,系用亞硝酸,于有鹽酸同在時(shí),將對(duì)-氨基苯磺酸(Ⅰ)進(jìn)行重氮化所得:
化合物(Ⅱ)的無(wú)色溶液,立刻和酚類及芳族胺類偶合而產(chǎn)生酸性或堿性的偶氮染料:
如果這個(gè)酚或胺的對(duì)位已被占,偶合作用就會(huì)在OH-基團(tuán)或NH2-基團(tuán)的鄰位上發(fā)生。同時(shí)必須加入碳酸鈉,使偶合作用能因而引起并使之完成。下列試験法,適合于快速檢定能與重氮化合物偶合的化合物。首先與此有關(guān)的,是酚類及芳族的伯、仲、叔胺類。
在咪唑衍生物方面,其與重氮化對(duì)-氨基苯磺酸的偶合,是在咪唑環(huán)的亞氨基α-位置上發(fā)生的:
對(duì)于組氨酸,式中R=CH2CH(NH2)COOH,對(duì)于組胺,式中R=CH2CH2(NH2)。
偶合作用,也可以在用某些其它含氮雜環(huán),如胸腺堿(5-甲基尿嘧啶)、硫胺素(維生素B1等)時(shí)及用脂族伯硝基化合物時(shí)發(fā)生。
操作手續(xù) 試劑一滴,與0.5%堿金屬亞硝酸鹽溶液一滴,在滴試板的凹處一起混和,然后加入試液一滴,并進(jìn)行攪拌。隨又引入10%NaHCO3溶液一滴,如顏色立即產(chǎn)生,即為正反應(yīng)。有些化合物可能產(chǎn)生較慢,等待1~2分鐘不算太長(zhǎng);遇此情況,有必要作一空白試驗(yàn)。在檢驗(yàn)醇溶液時(shí),往往需要作空白比較試驗(yàn)。
試劑:0.5%對(duì)-氨基苯磺酸在2%鹽酸中的溶液。
這個(gè)操作手續(xù)顯示出:
0.2微克 苯酚 | 紅-黃色 | 5微克 苯胺 | 綠-黃色 |
0.8微克 間-苯二酚 | 紅-棕色 | 1.5微克 二甲替苯胺 | 紅-棕色 |
5微克 對(duì)-羥基聯(lián)苯 | 棕色 | 2微克 二乙替苯胺 | 紅-棕色 |
2微克 α-萘酚 | 紅-棕色 | 0.1微克 間-羥基苯甲醛 | 棕-黃色 |
5微克 β-萘酚 | 黃色 | 50微克 對(duì)-羥基苯甲醛 | 橙-紅色 |
1.5微克 酪氨酸 | 紅色 |