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    此法的根據是各種物質在不相溶混的兩種溶劑間的分配系數的差異。它是一個逆流苯取過程，層析結果決定于溶質在移動相（有機溶劑）和固定相（由惰性材料支持體如硅酸凝膠所保持的水溶液）之間的分配。

    當流動相順支持劑（或叫“載體”）下流時，流動相和固定相不斷接觸，溶質就在兩相之間發(fā)生分配過程。由于各種物質分配系數不同，分配系數較大的物質（在固定相水中較易溶解）集中在柱的上端，反之，分配系數較小的物質則集中在柱的下端，因而分成不同的層。在層析中常用比移值R_f來表示物質在支持劑中移的動速率（圖6－2）當溶質層移動到柱的底部G時，溶劑前緣到達F：

R_f＝溶質的移動速率/溶劑的移動速率=OG/OF=OG/(OG+GF)

R_f值不僅隨物質的分配系數而變，而且和層析柱的裝置有關，因此層析柱中支持體的用量和松緊程度都要一致。根據R_f值可作定性分析。
    R_f值相差較大的物質可用分配層析法分離。