梯度洗脫
抖化學 / 2022-10-22
梯度洗脫LSC中經常遇到的是多組分樣品，其中同時包含有弱吸附物質(低的K'值)和強吸附物質(高的K'值)。沒有一個等強度的混合物能夠在合理的時間內，或以可測定的濃度洗脫全部組分，而又同時具有良好的分辨率。這種共同的情況稱為“洗脫色譜的普遍問題(GEP)”[13]。為了適當?shù)靥幚磉@類樣品，必須在色譜展開期間改變譜帶的遷移速度。程序變溶劑(梯度洗脫)是解決GEP最常用的技術。
程序變溶劑涉及到在色譜展開期間流動相強度的變化(即dδ°/dt )。通常是在分離過程中增加δ°值。變化可以分階或連續(xù)地進行。在HP-LC中不常采用階式變化，因為δ°值變化太劇烈時，可能發(fā)生溶質頂替作用。實際上，強得多的溶劑前沿經過柱子時把溶質“攜帶”在一起(即在此新的溶劑中K'≈0 ),它們流出時是未分開的或分辨很差的譜帶。如果其變化(δ°2~δ°1)較小，則溶質頂替的可能性就減少。Scott 和Kucera[19]提出，為了包括0≤δ°≤0.85這一范圍，至少需要12種純溶劑。
實驗上更方便的是調節(jié)一個或多個二元混合物的組成，而不是使用純溶劑來產生變溶劑程序。大多數(shù)現(xiàn)代液相色譜儀都設計成便于使用兩種溶劑梯度。如前所述，選擇兩種δ°值各不相同的溶劑并將其混合，就可以得到處于二者之間的任何δ°值。根據圖5-6可知,兩種溶劑的8°值相距越遠，溶劑的強度-組成曲線的初始部分就越陡峭。Snyderi24) 曾發(fā)現(xiàn)de9/dt的線性變化對于LSC是有利的，這是因為: (1)諸峰間隔相等，得到單位時間內的最大分離度; (2)近似于相等的譜帶寬度，可利用檢測器的最大靈敏度; (3)沒有由于壓縮了峰形拖尾而出現(xiàn)譜帶分裂，(4)對已經測量或估算了K'值的溶質則可計算其保留體積。當在程序變溶劑中使用二元溶劑混合物時，可利用凹形梯度輪廓來實現(xiàn)dδ°/dt的線性變化。圖5-8描述了甾體類在薄殼硅膠柱上進行的程序變溶劑的分離。
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