梯度洗脫
抖化學 / 2022-10-22
梯度洗脫LSC中經(jīng)常遇到的是多組分樣品，其中同時包含有弱吸附物質(zhì)(低的K'值)和強吸附物質(zhì)(高的K'值)。沒有一個等強度的混合物能夠在合理的時間內(nèi)，或以可測定的濃度洗脫全部組分，而又同時具有良好的分辨率。這種共同的情況稱為“洗脫色譜的普遍問題(GEP)”[13]。為了適當?shù)靥幚磉@類樣品，必須在色譜展開期間改變譜帶的遷移速度。程序變?nèi)軇?梯度洗脫)是解決GEP最常用的技術(shù)。
程序變?nèi)軇┥婕暗皆谏V展開期間流動相強度的變化(即dδ°/dt )。通常是在分離過程中增加δ°值。變化可以分階或連續(xù)地進行。在HP-LC中不常采用階式變化，因為δ°值變化太劇烈時，可能發(fā)生溶質(zhì)頂替作用。實際上，強得多的溶劑前沿經(jīng)過柱子時把溶質(zhì)“攜帶”在一起(即在此新的溶劑中K'≈0 ),它們流出時是未分開的或分辨很差的譜帶。如果其變化(δ°2~δ°1)較小，則溶質(zhì)頂替的可能性就減少。Scott 和Kucera[19]提出，為了包括0≤δ°≤0.85這一范圍，至少需要12種純?nèi)軇?/span>
實驗上更方便的是調(diào)節(jié)一個或多個二元混合物的組成，而不是使用純?nèi)軇﹣懋a(chǎn)生變?nèi)軇┏绦?。大多?shù)現(xiàn)代液相色譜儀都設計成便于使用兩種溶劑梯度。如前所述，選擇兩種δ°值各不相同的溶劑并將其混合，就可以得到處于二者之間的任何δ°值。根據(jù)圖5-6可知,兩種溶劑的8°值相距越遠，溶劑的強度-組成曲線的初始部分就越陡峭。Snyderi24) 曾發(fā)現(xiàn)de9/dt的線性變化對于LSC是有利的，這是因為: (1)諸峰間隔相等，得到單位時間內(nèi)的最大分離度; (2)近似于相等的譜帶寬度，可利用檢測器的最大靈敏度; (3)沒有由于壓縮了峰形拖尾而出現(xiàn)譜帶分裂，(4)對已經(jīng)測量或估算了K'值的溶質(zhì)則可計算其保留體積。當在程序變溶劑中使用二元溶劑混合物時，可利用凹形梯度輪廓來實現(xiàn)dδ°/dt的線性變化。圖5-8描述了甾體類在薄殼硅膠柱上進行的程序變?nèi)軇┑姆蛛x。
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