吸收光度法是通過測量溶液中物質又對光的吸收程度而測量其含量的方法。它是一種靈敏、準確、特效、快速而簡便的分析方法,目前廣泛用于工廠試驗室中,主要包括比色分析法和分光光度分析法。
每種物質對一定波長的光線具有選擇性吸收能力(溶液的顏色正是由于對光線選擇性吸收的結果)。為了提高測定的靈敏度和選擇性,吸收光度分析要求采用單色光源,通常有兩種途徑:是采用濾色器件,使使白熾燈光源發(fā)出的“白光”通過它之后,大部分光線被吸收,只有所需要的一定顏色的光通過,以作為測量光源;另一方式是采用棱鏡、光柵之類的分光器件,稱為單色器。白光通過它之后,由于折射或行射作用,將光分解成按一定順序排列的不同波長的單色光,通過狹縫選擇所需部分,作為測量光源。通常把采用濾光光源的吸收光度法稱做比色法,而把采用分光器件的稱為分光光度法,統(tǒng)稱吸收光度法。相應測量儀器分別稱做比色計和分光光度計。

目前國內外由于廣泛采用最新電子技術,已制造出準確度高,測定速度快,穩(wěn)定性好,操作簡便的各類型式的先進光度計,它是現(xiàn)代實驗室普遍使用的重要的有效工具之一。
吸收光度法基本定律:
1.當有色物質的濃度(C)一定時,,改變液層厚度L,即吸光度與液層厚度成正比,稱朗伯定律。
其數學表達式為
I0
log--—=K'L 或 E= K'L
I
式中 I。一 入射光光的強度;
I—— 透射光的強度
L-一 液層厚度;
E一- 有色物質的吸光度;
K'——比例系數。
它適用于一切有色溶液。
2.當液層厚度一定時,改變有色物質的濃度,吸光度與有色物質的濃度成正比,稱比爾定律。
其數學表達式為
過在當點時
I0
log--—=K''C 或 E= K''C
I
但并非所有有色溶液都符合比爾定律,因為當溶液的濃度改變時,有色溶液的電離,或聚合程度也隨著改變,因因而影響溶液的顏色的改變和光線的吸收。
3.如果同時改變液層厚度和有色溶液濃度兩個因素的影響,則可得:
I0
log--—=KCL 或 E= KCL
I
這就是朗伯一比爾定律的數學表達式,其物理意義是:有色物質的吸光度,即對于光線的吸收程度,與溶液中有色物質的濃度及液層厚度的乘積成正比例。式中K為常數,稱為“吸光系數”。如如溶液濃度(C)為1克分子/升(M),液層厚度(L)為1厘米時,則K稱為克分子吸光系數。不同的有色化合物,其K值也不同??朔肿游庀禂礙是有色化合物的重要特性,對于某種有色化合物及一定波長的入射光為一固定常數。K值愈大,說明該物質對光的吸收愈大,吸收光度測定的靈敏度也就愈高。
因此,作為吸收光度測定的有色化合物,應盡可能具有較大的克分子吸光系數(K)有色化合物的離解常數應小,這樣有色化合物就愈穩(wěn)定,其組成也較恒定,比色測定的準確度也就愈高。
在吸收光度法中生成有色化合物的化學反應主要有:氧化還原反應,絡合物形成的反應等,其中以絡合物形成的反應用得最廣。
無機試劑的比色法以硫氰酸鹽(用 NHCNS作顯色劑)和雜多酸(用(NH4)2MoO,等作顯色劑)兩大類型為主。前者可用來測鐵(Fe)、鎢(We+)、銷(Mo+)等;后者用以測硅、磷、砷(As")等.
有機顯色劑即為絡合劑,以偶氮染料(如二甲酚橙等)和三苯甲烷堿性染料(如PAN等)應用最廣最多。