紫外分光光度計的性能檢驗實驗
實驗室k / 2019-08-07
一、目的
本實驗使學生初步掌握紫外分光光度計部分性能的鑒定方法及儀器的使用方法。
二、提要
分光光度計性能的好壞，直接影響測定結果的準確程度。各國藥典中所采用的分光光度法大致分兩類：一以美國藥典為代表，不給出純品的吸收系數(shù)，但需備有標準品，測定時樣品和標準品同時操作，以抵消儀器的誤差；另一以英國藥典為代表，項目中給出純品的吸放系數(shù)，定量時與已知的吸收系數(shù)相比較即可，但對儀器的性能要求甚高。我國目前采用英國藥典常用法。
三、方法
1.吸收池的配對性 石英制的吸收池對紫外線亦稍有吸收，1cm的吸收池在220~280nm的波長范圍內(nèi)，以空氣為100％，其透光率往往小于100％，且每個吸收池吸收多少也不完全相同，在每次測定前應做吸收池的配對檢驗。
檢驗方法同比色法中比色皿的檢驗。
2.波長精度和重現(xiàn)性 用氫燈校正379～656nm一段譜帶中的幾個譜線，229～268nm一段譜線可用苯的吸收峰校正。
先以486.13nm氫燈譜線來校正儀器。將選擇開關轉(zhuǎn)至×0.1，透過率讀數(shù)放在100(或?qū)⑦x擇開關轉(zhuǎn)至×1透過率讀數(shù)放在10)，關小狹縫打開光門，緩緩轉(zhuǎn)動波長旋鈕尋找氫燈486.13nm峰出現(xiàn)的位置，然后按下列氫燈譜線測試656.28、581.21、486.13、434.05、379.79nm。
在短波段，因氫燈無分裂的譜線，可用苯的吸收峰校正波長。在25ml容量瓶內(nèi)，滴入一滴苯(A.R.)，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻后，以無水乙醇為空白，在225～270nm間用1cm石英池測定吸收度，苯在無水乙醇中的吸收峰如下：
229.2 233.9 238.9 243.3
248.5 254.5 260.6 268.4
在吸收峰附近每隔0.1nm測一讀數(shù)。
此外也可用鏷釹玻璃檢查波長精度，751型及CΦ-16型均備有鐠釹玻璃濾光片。
對波長精度和重現(xiàn)性的要求如下表(汞燈譜線)。
汞燈譜線的波長與精度及重現(xiàn)性的要求
| 波長(nm) |
精度(nm) |
重現(xiàn)性(nm) |
|
230.21
237.83
253.65
275.28
296.73
312.57
365.02
404.66
|
±3.0
±3.0
±3.0
±3.5
±3.5
±0.45
±0.60
±0.70
|
±0.15
±0.15
±0.15
±0.20
±0.20
±0.30
±0.30
±0.35
|
注：如用氫燈測定時，可參考近似的汞燈波長以確定精度與重現(xiàn)性的要求。
3.分辨率 用汞燈，狹縫寬度為0.02mm時，汞的365.02、365.48及366.33nm三條譜線應能分清，在儀器上有明顯反應。
4.吸收值精度和儀器線性范圍
(1)儀器和試劑：感量為0.1mg的分析天平，天平和砝碼應經(jīng)過檢定，合乎要求。500ml容量瓶、25ml容量瓶，凡容量儀器均應經(jīng)過校正合格。
蒸餾水應用玻璃磨口蒸餾器重蒸，貯于帶玻璃塞的瓶中。
0.02mol/L的H2SO4(A.R)，用上述蒸餾水配制，不必標定，但應一次配成1500ml以上，備用。
重鉻酸鉀標準試劑備用。
(2)溶液配制方法：精密稱取在105℃干燥至恒重的重鉻酸鉀基準試劑0.2g(稱準至0.1mg)，置500ml容量瓶中，用0.02mol/L的H2SO4液溶解，并稀釋至500ml，搖勻。
用滴定管精密量取上述重鉻酸鉀溶液1ml、2ml、3ml、…、10ml分別置于25ml容量瓶中，均用0.02mol/L的H2SO4稀釋至刻度，搖勻。
(3)測定方法：選好配對的1cm石英比色池，以0.02mol/L的H2SO4為空白，在波長235nm處測定各試液的吸收值(當吸收值大于1后，用×01檔)。
(4)計算方法：根據(jù)稱樣及稀釋度，計算出各個的吸收系數(shù)，在直角坐標紙上，以各吸收值為橫坐標，相應的吸收系數(shù)為縱坐標，繪出吸收系數(shù)-吸收值曲線。
一般來說，儀器測出的吸收系數(shù)，在吸收值過小時，常偏高，過大時，常偏低，其間有一段坪區(qū)，在這區(qū)間測出的吸收值計算出的吸收系數(shù)是一個常數(shù)，它與平均值的偏差不超過±0.2％的一段，為這臺儀器的線性范圍或最佳工作范圍。
波長(nm) 吸收系數(shù)(E1cm1%) 允許誤差
235 124.3 122.0~125.5
5.雜散光 用有玻璃接口的蒸餾器重蒸的蒸餾水和試劑規(guī)格的氯化鉀1.2g，配成100ml水溶液。以蒸餾水作為空白，用1cm吸收池在200nm波長測定，透過率應小于1.0％。
.jpg "紫外分光光度計")
閩ICP備15011996號-4
|
閩公網(wǎng)安備35040002000218號
|
