甲烷直接催化氧化制甲醇
化學(xué)先生 / 2019-07-30
甲烷直接催化氧化制甲醇是甲烷單加氧酶最基本的催化反應(yīng),在自然界已發(fā)現(xiàn)的天然酶中,只有甲烷單加氧酶具有這一催化功能。目前,被公認(rèn)的反應(yīng)機(jī)制是甲烷單加氧酶中的羥基化酶(MMOH)、還原酶(MMOR)和調(diào)節(jié)蛋白B (MMOB)必須協(xié)同作用,才能活化甲烷和分子氧,將一個(gè)氧原子插入到甲烷的C--H鍵中生成甲醇,因此甲烷單加氧酶是包含三個(gè)組分的酶系。和其它氧化還原酶一樣,為了活化分子氧,在反應(yīng)中還需要輔酶NADH作為電子給體,還原酶能從NADH接受電子,將其傳遞給羥基化酶:而調(diào)節(jié)蛋白B則在還原酶和羥基化酶之間的電子傳遞過(guò)程中起促進(jìn)作用,提高甲烷單加氧酶的催化活性。這一反應(yīng)機(jī)制,已被來(lái)源于不同菌株的甲烷單加氧酶的催化化學(xué)研究所證實(shí)。
研究還發(fā)現(xiàn),sMMO的催化活性要比pMMO高,不同來(lái)源的sMMO,其理化性質(zhì)、催化功能與蛋白質(zhì)序列都非常相似。在甲烷氧化菌細(xì)胞中,由甲烷催化氧化生成的甲醇,會(huì)在甲醇脫氫酶的作用下生成甲醛,大約有50%的甲醛被同化,作為細(xì)胞生長(zhǎng)的碳源,另外的50%甲醛在甲醛脫氫酶的作用下,進(jìn)一步氧化形成甲酸,最后再通過(guò)甲酸脫氫酶轉(zhuǎn)化為二氧化碳和水,獲得細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的能量。NADH在分子氧活化中失去電子后被氧化為NAD+,NAD+在甲醇、甲醛和甲酸的后續(xù)脫氫反應(yīng)中可以再生為NADH,因此在甲烷氧化菌細(xì)胞中,甲烷催化氧化生成甲醇的反應(yīng)不需要添加外源電子給體。sMMO的電子給體是NADH,但pMMO的電子給體是否也為NADH尚不清楚,據(jù)推測(cè)有可能是細(xì)胞色素B559/569或細(xì)胞色素C/C553.
在甲烷單加氧酶細(xì)胞外進(jìn)行甲烷催化氧化制甲醇反應(yīng),也可以采用四甲基對(duì)苯二酚和NADH2作為外源電子給體,但必領(lǐng)考慮輔酶再生和循環(huán)使用問(wèn)題。從應(yīng)用角度考慮,最好使反應(yīng)在整細(xì)胞中進(jìn)行,可以免去提酶,并且在細(xì)胞內(nèi)有天然的電子給體系統(tǒng)和完美的MMO三組分協(xié)調(diào)作用機(jī)制,以保證催化反應(yīng)的穩(wěn)定、高效與連續(xù)性。但作為甲烷氧化細(xì)菌的能源和碳源,甲烷被氧化為甲醇后,在細(xì)胞中一系列脫氫酶的作用下會(huì)被繼續(xù)氧化,最后生成CO2和H2O.若想累積甲醇,必須阻斷它的后續(xù)氧化過(guò)程,而細(xì)胞中沒(méi)有甲醛生成,不但會(huì)影響細(xì)胞的代謝過(guò)程,也喪失了NAD+還原為NADH的動(dòng)力。目前,尚未找到解決這一矛盾的有效途徑,從而影響了甲烷生物催化氧化制甲醇,以及其它類似的生物催化氧化過(guò)程在化學(xué)工業(yè)中的實(shí)際應(yīng)用。