581－G型光電比色計和72型分光光度計，工作波段都在400～800nm范圍內(nèi)，只能測定物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收光譜，而國產(chǎn)75－1型分光光度計，工作波段在200～1000nm范圍內(nèi)，可測定物質(zhì)在紫外區(qū)，可見光區(qū)及近紅外區(qū)的吸收光譜，因而它的應用范圍更為廣泛。
下面介紹一下紫外吸收光譜在分析工作中的應用：
根據(jù)物理知識，光波的波長愈短，能量愈大。紫外光的波長范圍為200～400nm，而可見光的波長范圍為400～800nm。所以紫外光的能量比可見光的能量大，可見光只能激發(fā)物質(zhì)分子中處于不穩(wěn)定能級的價電子，而紫外光可激發(fā)比較穩(wěn)定的不飽和鍵的π電子，尤其是共軛體系中π電子。因而共軛的不飽和碳氫化合物和具有孤對電子的化合物（包括無機化合物）在紫外區(qū)都有吸收光譜。反之，飽和的碳氫化合物在紫外區(qū)不產(chǎn)生吸收峰，因此，常以飽和的碳氫化合物作為紫外吸收光譜分析的溶劑（例如己烷、庚烷、環(huán)己烷等）。
紫外吸收光譜大多應用于鑒定含有雙鍵、尤其是共軛體系的化合物，如含羰基、醛基、羧基、硝基等的脂肪族化合物，以及含苯環(huán)的芳香族化合物。
.jpg "可見紫外分光光度計")
75－1型分光光度計（圖13－15）采用自準式光路，單光束非記錄型，其波長范圍為200～1000nm。在波長320～1000nm范圍內(nèi)，用鎢絲白熾燈泡作光源，在波長200～320nm范圍內(nèi)，用氫弧燈作光源。
.jpg "75－1型分光光度計光學系統(tǒng)立體圖")
由光源（3或1）發(fā)出的連續(xù)輻射光線，射到聚光凹面鏡2上，被反射到平面鏡4，然后又反射至入射狹縫S1上，由此入射到單色器內(nèi)。而狹縫S1正好位于球面準直物鏡7的焦面上，因此入射光線到達物鏡7上反射后，就以一束平行光射向棱鏡8（該棱鐿背面是鍍鋁的），入射角在最小偏向角，入射光穿過石英棱鏡，為棱鏡底面所反射，重又穿過棱鏡。經(jīng)過棱鏡的色散作用，分開為光譜帶。這樣從棱鏡色散出來的光線經(jīng)準直物鏡7反射后，就會聚在出射狹縫S2上。為了消除雜散光對測量結(jié)果的影響，在出射狹縫S2后裝有濾光片10。光線經(jīng)過濾光片后進入試樣室，室中裝著被測溶液的比色槽，光線通過被測溶液比色槽后照射到光電管的陰極面上，產(chǎn)生光電流。光電流在一個高電阻上產(chǎn)生電壓降，此電壓降由直流放大器放大后用精密電位計測量，即可得到溶液的透射百分率或光密度。
儀器按說明書安裝，調(diào)校正常后，使用時操作步驟如下。
（1）開穩(wěn)壓電源，開所需光源（鎢燈6V，適用波長320～1000nm；氫弧燈調(diào)節(jié)至300毫安，適用波長200～320nm），并將燈罩上反射鏡轉(zhuǎn)動手柄扳在“鎢燈”或“氫弧燈”位置。
（2）將暗電流閘門處在“關”的位置。
（3）將選擇開關扳在“校正”上。
（4）調(diào)節(jié)暗電流鈕使電表指零。
（5）靈敏度調(diào)節(jié)位置是從左面停止位置順時針方向轉(zhuǎn)動五圈左右。
（6）將波長刻度旋在所需波長上。
（7）選定適應波長的光電管，手柄推入為紫敏光電管（200～625nm），手柄拉出為紅敏光電管（625～1000nm）（根據(jù)需要可以用相應的濾光片推入光路，以減少雜散光，通常情況下可以不用）。
（8）根據(jù)波長選用比色槽。對于350nm以上的波長，可用玻璃比色槽。對于350nm以下，一定要用石英比色槽。將比色槽放入托架內(nèi)（其中一個槽內(nèi)裝空白溶液，另外三個裝被測溶液），將空白溶液置于光路中，然后把蓋板蓋好。
（9）把讀數(shù)電位器放在透光率100％上。
（10）把選擇開關扳到“×1”上。
（11）拉拉桿13，拉開暗電流閘門，使單色光進入光電管。
（12）調(diào)節(jié)狹縫大致使電表指針指零，而后再用靈敏度旋鈕細調(diào)，使電表指針準確指在零上。
（13）將試樣溶液置于光路中（同時注意滑板是否處在定位槽中），這時電表指針偏離“零”位。
（14）旋轉(zhuǎn)讀數(shù)電位器刻度盤重新使電表指針指零。
（15）在平衡之后，將暗電流閘門重新關上，以便保護光電管，勿使其因受光時間過長而疲勞。
（16）讀取透過率或相應的消光值：當選擇開關放在“×1”上，透光率范圍是0～100％，相應的消光值范圍是∞～0。當透光率小于10％時，則可將選擇開關放在“×0．1”的位置上，得到較精確的讀數(shù)，此時所讀出的透光率數(shù)值，應以10除之，或相應地對于所讀出的消光值應加1．0。
（17）測定完畢，應切斷電源，將選擇開關放在“關”，取出比色槽，用罩罩好整個儀器。
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