國(guó)產(chǎn)72型分光光度計(jì)的基本工作原理與上述單光電池光電比色計(jì)相似,但分光光度計(jì)的單色光器比濾光片所選擇的波長(zhǎng)范圍小的多,可以認(rèn)為近似單色光;其次加設(shè)了穩(wěn)定電壓的專(zhuān)門(mén)裝置;微電流檢流計(jì)也比較精密一些,且單獨(dú)另設(shè)一個(gè)裝置系統(tǒng)。為攜帶、運(yùn)輸方便,72型分光光度計(jì)制作成三個(gè)組成部分。
圖7-28是72型分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)工作原理示意圖。
從光源1發(fā)出白光,經(jīng)過(guò)光狹縫2射到反射鏡3,反射到聚光透鏡4后,成為平行光射入棱鏡5。經(jīng)棱鏡折射色散后,各種波長(zhǎng)的單色光排列成光譜的形狀射在鍍鋁的反射鏡6上,反射鏡可以轉(zhuǎn)動(dòng)選擇某種所需波長(zhǎng)的單色光反射到聚光透鏡7上(與反射鏡裝在一個(gè)控制盤(pán)上)。從透鏡7射出的光是單色的平行光,經(jīng)過(guò)出光狹縫8射到盛有色溶液的比色槽9。沒(méi)被溶液吸收的透過(guò)光,經(jīng)光亮調(diào)節(jié)器10射到硒光電池11上,光電池產(chǎn)生的光電流產(chǎn)生磁場(chǎng)帶動(dòng)鏡式檢流計(jì)映出光亮點(diǎn)射在檢流計(jì)的標(biāo)尺上。讀取數(shù)據(jù),進(jìn)行計(jì)算求出溶液中所含物質(zhì)的量。
為敘述方便,參看(圖7-29)72型分光光度的外形示意圖加以說(shuō)明。
(1)按接線(xiàn)要求將穩(wěn)壓器和微電流計(jì)接在單色器上。注意微電流計(jì)和單色器相接時(shí),三股接線(xiàn)顏色是:紅色接“+”,綠色接“-”,黃(或黑)色接。單色器要接在穩(wěn)壓器的輸出接線(xiàn)柱上。
(2)電源電壓與儀器電壓相符時(shí),插上電源。
(3)把單色光器的光路閘門(mén)扳到黑點(diǎn)(光路關(guān)閉指示)位置后,再將微電流計(jì)上的電源開(kāi)關(guān)扳到開(kāi)處。此時(shí)指示光亮點(diǎn)即出現(xiàn)在檢流計(jì)標(biāo)尺上。用0點(diǎn)調(diào)節(jié)器將光亮點(diǎn)準(zhǔn)確地調(diào)至透光率標(biāo)尺的0刻度上。
(4)打開(kāi)穩(wěn)壓器的電源開(kāi)關(guān)和單色器的光源開(kāi)關(guān),把光路閘門(mén)扳到紅點(diǎn)(光路打開(kāi)指示)上,再以順時(shí)針?lè)较蛘{(diào)光亮調(diào)節(jié)器至光門(mén)適當(dāng)開(kāi)啟,使微電流計(jì)上光亮點(diǎn)達(dá)到標(biāo)尺上限附近。停10分鐘后,待光電池趨于穩(wěn)定后再開(kāi)始操作。
(5)將單色光器上的光路閘門(mén)再扳回黑點(diǎn)處,重新校正微電流計(jì)的指示光亮點(diǎn)于0位上,立即開(kāi)啟光路閘門(mén)。
(6)將比色槽暗廂蓋打開(kāi),取出比色槽架,將四只比色槽中的一只裝入蒸餾水或空白溶液,其余三只裝被測(cè)樣品溶液。將比色槽置于架上,空自溶液槽放在第一格上,放回暗廂內(nèi),加蓋蓋好。先將空白溶液槽推入光路。
(7)用波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器選好所需波長(zhǎng)對(duì)準(zhǔn)紅線(xiàn)。將光亮調(diào)節(jié)器以順時(shí)針或逆時(shí)針?lè)较蜉p輕轉(zhuǎn)動(dòng),使光亮點(diǎn)中線(xiàn)準(zhǔn)確地對(duì)準(zhǔn)透光率100的刻度上。
(8)以上調(diào)節(jié)好后,可以進(jìn)行樣品溶液的比色測(cè)定。將比色槽的定位裝置拉桿輕輕拉出一格,使第二個(gè)比色槽內(nèi)的待測(cè)溶液進(jìn)入光路。此時(shí),微電流計(jì)標(biāo)尺上光亮點(diǎn)所指示的讀數(shù)即為該溶液的光密度或透光率。依此測(cè)定第二、第三個(gè)待測(cè)溶液,并讀出數(shù)據(jù)。
(9)儀器在使用過(guò)程中,應(yīng)經(jīng)常關(guān)閉光路閘門(mén)來(lái)核對(duì)微電流計(jì)的0點(diǎn)位置是否有改變。如有改變,及時(shí)用0點(diǎn)調(diào)節(jié)器糾正。
注意某一測(cè)定溶液所需的波長(zhǎng)往往有一個(gè)范圍,即有幾個(gè)波長(zhǎng)均可作該溶液的吸收光帶,這時(shí)一般選用吸收度最大的波長(zhǎng)。
所制成的溶液濃度應(yīng)盡量使光密度值在0.1~0.6的范圍以?xún)?nèi)進(jìn)行測(cè)定。這樣所測(cè)得的讀數(shù)誤差較小。如光密度在0.1~0.6范圍外,可調(diào)節(jié)溶液濃度,稀釋或加濃,或者改選擇適當(dāng)波長(zhǎng)的單色光。