用四溴酚酞乙酯的試驗法
固體或溶解的四溴酚酞乙酯:
是黃色的,但其水溶的堿金屬鹽卻是藍色的。這些鹽類可被稀醋酸分解,同時再生出酚。這個酯如和膠態(tài)的朊類接觸,則會現(xiàn)出藍色。顯然,這是由于形成似鹽吸附化合物的緣故,這種化合物與堿金屬鹽不同,是不會被稀醋酸分解的。這似與一種被稱為指示劑的“朊誤差”(pH指示劑轉變范圍的位移)的現(xiàn)象有關。這個效應很強烈地被四溴酚酞乙酯示出。尤其是它的穩(wěn)定鉀鹽,其藍色溶液可被稀醋酸轉成黃色(游離酯類的顔色)。但有朊存在藍色將持久保留。只有加入濃醋酸或無機酸才變成黃色。
這個反應對于天然朊類似具有特效性。朊的分裂產物如氨基酸類,二肽類及三肽類或腖類都無反應。
生物堿類如大量存在,也示出與天然朊類相似的性行,這可能是由于膠態(tài)分散生物堿和四溴酚酞乙酯形成吸附化合物的緣故,這些吸附化合物也耐醋酸。
操作手續(xù) 試液一滴與藍色試劑溶液一滴在一滴試板上混和,然后用0.2N醋酸1~2滴酸化??瞻自囼?,將變成黃色,而含朊類試樣的深藍色仍保持不變。如僅有小量朊存在,其色帶綠。
試劑:0.1%四溴酚酞乙酯鉀鹽的酒精溶液。
下列各物可被檢出:
| 0.5微克 蛋白朊 | 0.5微克 酪朊 | 0.5微克 鮭精朊 |
| 0.5微克 血紅朊 | 5微克 麻仁球朊 | 1微克 麩朊 |
| 0.35微克 血清白朊 | 0.5微克 鯡精朊 |
尿中病理增加的朊含量,可用這個反應,在一滴尿中作出檢定。
水解分裂或熱分裂成氨基化合物或亞氨基化合物后的試驗法
朊類被濃無機酸水解產生更簡單的分裂產物,如多肽類,氨基酸類等。由于色氨酸是幾乎一切朊類的組份,它分解而產生吲哚及吲哚衍生物。這些氨基及亞氨基產物,可由和氯化螢光素熔化,或和對-二甲胺基苯(甲)醛縮合來作出檢定。后法中氨基可以產生有色希夫氏堿類。朊類因酸分裂所形成的吲哚堿類的縮合作用,顯然在下列用對-二甲胺基苯(甲)醛的試驗法中,為一主要的反應。
操作手續(xù) 待試朊類的試樣(固體或其溶液)在一微量坩堝中,與對-二甲胺基苯(甲)醛的飽和冰醋酸溶液數(shù)滴及發(fā)煙鹽酸一滴混和。如有紫色出現(xiàn),即示有朊類存在。
下列鑒定限度,曾經(jīng)測出:
| 1微克 干腖 | 30微克 蛋白朊 |
| 20微克 血白朊 | 5微克 酪朊 |
| 100微克 皮粉 | 60微克 胰酶 |
| 10微克 麻仁球朊 | 胃朊酶,極不靈敏 |
甲狀腺球朊示出正的白朊反應,但用純甲狀腺素的反應則是負的。腦垂體制劑給出正反應。碳水化合物的混合物中,即使少至1%的白朊(例如麻仁球朊)也可清楚地作出檢定。
干熱也可使朊類發(fā)生分裂。產生的吡咯及吡咯衍生物隨燃燒產物一同揮發(fā)。如將它們與曾用5%對-二甲胺基苯(甲)醛的濃鹽酸(或三氯醋酸)溶液浸滲過的濾紙接觸,現(xiàn)出紫色。這個熱分解過程可在微量坩堝中,或在微量試管中進行。鑒定限度為100微克左右的朊類。